黄曲霉毒素M1是一种强致癌物质，近来国内报道某品牌乳制品中检测到黄曲霉毒素M1，消息一出顿时又掀起一股食品安全隐患的讨论。相比之前的三聚氰胺，黄曲霉素是否更难检测？
中华试剂网现已整理出全套的专业检测方案，让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处躲藏。
1. 试用范围
牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等乳制品
2. 方法原理
黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂，因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取，对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化，荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素M1。
3. 所需设备和耗材
黄曲霉毒素免疫亲和柱：Welchrom® IAC (1ml，25支/盒；3ml，15支/盒)（上海月旭提供）；
高效液相装置带荧光检测器；
均质机；
水平振荡器；
SPE转接头及50ml大容量上样器：Welchrom® SPE Adapter（上海月旭提供）；
分析天平（精度0.02 g)；
SPE装置带抽真空系统：Welchrom® SPE Device（上海月旭提供）；
黄曲霉毒素M1标准品；
PBS 缓冲溶液：称取1.16 g Na2HPO4，0.20 g KH2PO4，8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中，用HCL或NaOH调节pH至7.4，然后定容至1000ml；
甲醇（色谱纯）；
乙腈（色谱纯）；
正己烷（分析纯）。
4. 样品前处理
称取25g(精确至0.01 g)混匀的样品，置于50 mL具塞离心管中，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化；
称取25 g(精确至0.01 g)混匀的样品，用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4，9500r/min下均质5 min，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化。
称取10 g(精确至0.01 g)样品置于250 mL烧杯中，加入50 mL约50 ℃的水于乳粉中，玻璃棒搅拌均匀。溶解后冷却至室温，移入100 mL容量瓶中，水洗烧杯并转移洗涤液，用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15 min，混合上清液，取50mL上清液待净化。
切取均质的样品5g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇，9500 r/min下匀浆5 min，超声提取30 min，6000r/min下离心10 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中，同时加入30 mL正己烷，振摇2 min，分层后，弃去正己烷层。重复用正己烷提取2次。提取液减压浓缩至约2 mL，转移浓缩液至离心管，烧瓶用甲醇-水溶液(1+4)5 mL分2次洗涤并倒入50 mL离心管中，加PBS溶液稀释至50 mL，6000r/min下离心5 min，上清液待净化。
称取5g(精确至0.01 g)试样，置于50 mL烧杯中，用20 mL正己烷将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇，振荡30 min后，将全部液体移于分液漏斗中，待分层后，将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中，旋转蒸发仪减压浓缩至约5 mL，加PBS稀释至约50mL，待净化。
5. 免疫亲和柱净化（3cc）
- 将IAC装于固相萃取装置上，接上大体积上样器，10ml PBS溶液活化柱子，流速保持在2–3 ml/min，确保上样前柱子保留少量（0.5ml）的PBS溶液，活化液不收集；
- 将待净化液加入免疫亲和柱，流速不超过5 mL/min，不收集流出液；
- 用约20ml去离子水淋洗柱子，流速不超过5 mL/min，抽真空1分钟，不收集流出液；
- 用1.5ml甲醇洗脱，流速控制在1d/s，收集洗脱液过膜后上机测试。
注：免疫亲和柱从冰箱去除需升到室温后使用
6. 色谱条件：
色谱柱： Ultimate® XB-C18 250 mm x 4.6 mm，5µm（上海月旭提供）
预柱： Ultimate® C18，5µm，ULT5BG18（上海月旭提供）
流动相： 水:甲醇:乙腈=11:4:5
柱温： 35℃
检测波长： 发射波长：365nm，激发波长：450nm
进样量： 100µL
附：测试谱图
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分析物
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添加水平（µg/kg）
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回收率(%)
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RSD(%)
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Aflatoxin M1
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2 µg/kg
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98.8
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4.2
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CAS编号
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产品名称
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包装
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目录价
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黄曲霉毒素B1
Aflatoxin B1
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5 mg
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￥1,320
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黄曲霉毒素B2
Aflatoxin B2
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1 mg
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￥924
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黄曲霉毒素G1
Aflatoxin G1
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1 mg
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￥990
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BIA4311
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黄曲霉毒素G2
Aflatoxin G2
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1 mg
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￥2,112
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黄曲霉毒素M1
Aflatoxin M1
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100 μg
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￥1,430
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黄曲霉毒素M2
Aflatoxin M2
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100 μg
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￥4,180
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34037
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赭曲霉素A
Ochratoxin A
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10 µg/mL乙腈溶液
2 mL
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￥2,281
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O148500
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赭曲霉素B
Ochratoxin B
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5 mg
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￥2,100
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O148510
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赭曲霉素C
Ochratoxin C
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5 mg
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￥2,450
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51481-10-8
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呕吐毒素（脱氧镰刀菌烯醇）
Deoxynivalenol
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1 mg
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￥1100
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伏马毒素（烟曲霉毒素）B1
Fumonisin B1
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1 mg
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￥1,182
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伏马毒素（烟曲霉毒素）B2
Fumonisin B2
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1 mg
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￥3180
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B-MYCO425-1
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伏马毒素（烟曲霉毒素）B3
Fumonisin B3
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50 µg/mL乙腈：水溶液
1 mL
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询价
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伏马毒素（烟曲霉毒素）C
Fumitremorgin C
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250 μg
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￥2,502
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BIT1041
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T-2毒素
T-2 Toxin
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1 mg
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￥660
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BIZ0112
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玉米赤霉烯酮
Zearalenone
|
5 mg
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￥990
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BIH1001
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HT - 2-毒素
HT-2 Toxin
|
1 mg
|
￥1,760
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