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乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的检测方案

2012/6/9 20:04:05  作者:labgogo


   黄曲霉毒素M1是一种强致癌物质,近来国内报道某品牌乳制品中检测到黄曲霉毒素M1消息一出顿时又掀起一股食品安全隐患的讨论。相比之前的三聚氰胺,黄曲霉素是否更难检测?

中华试剂网现已整理出全套的专业检测方案,让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处躲藏。

1. 试用范围
    牛奶,奶粉,发酵乳,干酪,奶油等乳制品
 
2. 方法原理
    黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂,因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取,对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化,荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素M1。
 
3. 所需设备和耗材
    黄曲霉毒素免疫亲和柱:Welchrom® IAC (1ml,25支/盒;3ml,15支/盒)(上海月旭提供);
    高效液相装置带荧光检测器;
    均质机;
    水平振荡器;
    SPE转接头及50ml大容量上样器:Welchrom® SPE Adapter(上海月旭提供);
    分析天平(精度0.02 g);
    SPE装置带抽真空系统:Welchrom® SPE Device(上海月旭提供);
    黄曲霉毒素M1标准品;
    PBS 缓冲溶液:称取1.16 g Na2HPO4,0.20 g KH2PO4,8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中,用HCL或NaOH调节pH至7.4,然后定容至1000ml;
    甲醇(色谱纯);
    乙腈(色谱纯);
    正己烷(分析纯)。
 
4. 样品前处理
  • 牛奶样品
    称取25g(精确至0.01 g)混匀的样品,置于50 mL具塞离心管中,水浴加热至35℃~37 ℃,6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液,待净化;
  • 发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)
    称取25 g(精确至0.01 g)混匀的样品,用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4,9500r/min下均质5 min,水浴加热至35℃~37 ℃,6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液,待净化。 
  • 乳粉和粉状婴幼儿配方乳制品
    称取10 g(精确至0.01 g)样品置于250 mL烧杯中,加入50 mL约50 ℃的水于乳粉中,玻璃棒搅拌均匀。溶解后冷却至室温,移入100 mL容量瓶中,水洗烧杯并转移洗涤液,用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15 min,混合上清液,取50mL上清液待净化。
  • 干酪
    切取均质的样品5g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中,加2 mL水和30 mL甲醇,9500 r/min下匀浆5 min,超声提取30 min,6000r/min下离心10 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中,同时加入30 mL正己烷,振摇2 min,分层后,弃去正己烷层。重复用正己烷提取2次。提取液减压浓缩至约2 mL,转移浓缩液至离心管,烧瓶用甲醇-水溶液(1+4)5 mL分2次洗涤并倒入50 mL离心管中,加PBS溶液稀释至50 mL,6000r/min下离心5 min,上清液待净化。
  • 奶油
    称取5g(精确至0.01 g)试样,置于50 mL烧杯中,用20 mL正己烷将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇,振荡30 min后,将全部液体移于分液漏斗中,待分层后,将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中,旋转蒸发仪减压浓缩至约5 mL,加PBS稀释至约50mL,待净化。

5. 免疫亲和柱净化(3cc
  • 将IAC装于固相萃取装置上,接上大体积上样器,10ml PBS溶液活化柱子,流速保持在2–3 ml/min,确保上样前柱子保留少量(0.5ml)的PBS溶液,活化液不收集;
  • 将待净化液加入免疫亲和柱,流速不超过5 mL/min,不收集流出液;
  • 用约20ml去离子水淋洗柱子,流速不超过5 mL/min,抽真空1分钟,不收集流出液;
  •  用1.5ml甲醇洗脱,流速控制在1d/s,收集洗脱液过膜后上机测试。
    注:免疫亲和柱从冰箱去除需升到室温后使用
 
6. 色谱条件:
    色谱柱:   Ultimate® XB-C18 250 mm x 4.6 mm,5µm(上海月旭提供)
    预柱:     Ultimate® C18,5µm,ULT5BG18(上海月旭提供)
    流动相:   水:甲醇:乙腈=11:4:5
    柱温:     35℃
    检测波长: 发射波长:365nm,激发波长:450nm
    进样量:   100µL
 
附:测试谱图
 
分析物
添加水平(µg/kg)
回收率(%)
RSD(%)
Aflatoxin M1
2 µg/kg
98.8
4.2

 

CAS编号
产品名称
包装
目录价
黄曲霉毒素B1
Aflatoxin B1
5 mg
¥1,320 
黄曲霉毒素B2
Aflatoxin B2
1 mg
¥924 
黄曲霉毒素G1
Aflatoxin G1
1 mg
¥990 
BIA4311
黄曲霉毒素G2
Aflatoxin G2
1 mg
¥2,112 
黄曲霉毒素M1
Aflatoxin M1
100 μg
¥1,430 
黄曲霉毒素M2
Aflatoxin M2
100 μg
¥4,180 
34037
赭曲霉素A
Ochratoxin A
10 µg/mL乙腈溶液
2 mL
¥2,281 
O148500
赭曲霉素B
Ochratoxin B
5 mg
¥2,100 
O148510
赭曲霉素C
Ochratoxin C
5 mg
¥2,450 
51481-10-8
呕吐毒素(脱氧镰刀菌烯醇)
Deoxynivalenol 
1 mg
¥1100
伏马毒素(烟曲霉毒素)B1
Fumonisin B1
1 mg
¥1,182
伏马毒素(烟曲霉毒素)B2
Fumonisin B2
1 mg
¥3180
B-MYCO425-1
伏马毒素(烟曲霉毒素)B3
Fumonisin B3
50 µg/mL乙腈:水溶液
1 mL
询价
伏马毒素(烟曲霉毒素)C
Fumitremorgin C
250 μg
¥2,502 
BIT1041
T-2毒素
T-2 Toxin
1 mg
¥660 
BIZ0112
玉米赤霉烯酮
Zearalenone
5 mg
¥990 
BIH1001
HT - 2-毒素
HT-2 Toxin
1 mg
¥1,760 

 

 

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