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单胺氧化酶（MAO）活性检测试剂盒说明书

2024/9/9 9:24:53  作者：索莱宝

 

 
BC0015 -- 第 1 页，共 3 页
单胺氧化酶（MAO）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0015
规格：100T/96S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称
规格
保存条件
提取液一
液体 110 mL×1 瓶
2-8℃保存
提取液二
液体 110 mL×1 瓶
2-8℃保存
试剂一
液体 45mL×3 瓶
2-8℃保存
试剂二
液体 3 mL×1 瓶
2-8℃保存
产品说明：
MAO（EC1.4.3.4）包括 MAO-A 和 MAO-B，是一种结合在线粒体外膜上的黄素蛋白，可催化神经递质和生
物胺氧化脱氨。单胺氧化酶与机体老化有关，被认为是衰老的标志，其主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是
分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理
功能。
MAO 催化单胺类底物脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸，底物在 360nm 处有特征吸收峰，通过测定 360nm
处光吸收下降的速率，可计算 MAO 活性。
Monoamine Substrate（360nm） Acids
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱中、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、
震荡仪、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、 临用前根据实验用量取出部分提取液一、提取液二和试剂一置于 4℃预冷 30min。
2、 组织样本：按照样本质量（g）：提取液一体积（mL）为 1:5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆；1000g 4℃离心 10min，取上清，将上清液转移至预冷的离心管，于 10000g，
4℃离心 30min。弃上清，沉淀中加入 1mL 预冷的提取液二，振荡混匀，于 16000g，4℃离心 40min，弃上清，加
入 1mL 试剂一，振荡混匀，置冰上待测。
3、 细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10
4
个）：提取液
一体积（mL）为 500~1000:1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液一）加入提取液一，超声波破碎
细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min），1000g，4℃离心 10min，取上清，将上清液
转移至预冷的离心管，于 10000g，4℃离心 30min。弃上清，沉淀中加入 1mL 预冷的提取液二，振荡混匀，于 16000g，
4℃离心 40min，弃上清，沉淀中加入 1mL 试剂一，振荡混匀，置冰上待测。
MAO
 
 
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4、 血清（浆）或液体样本：直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。
二、测定步骤
1、紫外分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 360nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2、加样表（在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中依次加入下列试剂)：
试剂名称（μL）
测定管
空白管
样本（μL）
20
-
试剂一（μL）
160
180
试剂二（μL）
20
20
将上述试剂分别加入微量石英比色皿/96 孔 UV 板中，迅速吹打混匀，分别测定 360nm 处 第 10s 的
吸光值，记为 A 测定管 1、A 空白管 1；然后置于 37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应 2h，测定 360nm 处
吸光值，记为 A 测定管 2、A 空白管 2，计算 ΔA 测定=A 测定管 1-A 测定管 2，ΔA 空白= A 空白管 1-A
空白管 2。ΔA=ΔA 测定-ΔA 空白。空白管只需测 1-2 次。
三、MAO 活力的计算
a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白质浓度计算
酶活定义：37℃，pH7.6 条件下，每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性（U/mg prot）= ΔA÷?÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样×Cpr)÷T=57.08×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算
酶活定义：37℃，pH7.6 条件下，每 mg 组织每分钟消耗 1nmol 底物定义的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性（U /g 质量）= ΔA÷?÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样÷V 样总×W)÷T=57.08×ΔA÷W
3、按细菌/细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH7.6 条件下，每 10
4
细菌/细胞每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性（U /10
4
cell）= ΔA÷?÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T=57.08×ΔA÷细胞数量
4、 按照样本体积计算
酶活定义：37℃，pH7.6 条件下，每 mL 血清或液体样本每分钟消耗 1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性（U /mL）=ΔA÷?÷d ×V 反总×10
9
÷V 样÷T= 57.08×ΔA
ε：底物摩尔消光系数：1460L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，0.0002L；V 样：加入
样本体积，0.02mL，V 样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时
间，120min；10
9
：单位换算系数，1mol=10
9
nmol。
b．用 96 孔 UV 板测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白质浓度计算
酶活定义：37℃，pH7.6 条件下，每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性（U /mg prot）= ΔA÷?÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样×Cpr)÷T= 95.13×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算
酶活定义：37℃，pH7.6 条件下，每 g 组织每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性（U /g 质量）= ΔA÷?÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样÷V 样总×W)÷T= 95.13×ΔA÷W
3、按细菌/细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH7.6 条件下，每 10
4
细菌/细胞每分钟消耗 1nmol 底物的酶量定义为一个酶活单位。
MAO 活性（U /10
4
cell）= ΔA÷?÷d ×V 反总×10
9
÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T= 95.13×ΔA÷细胞数量

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