DEAE-ç¼è„‚ç³–å‡èƒ¶FF
DEAE-ç¼è„‚ç³–å‡èƒ¶FF是将二乙胺基乙基键åˆåœ¨å¿«æµé€Ÿç¼è„‚ç³–å‡èƒ¶ä¸Šå½¢æˆçš„一ç§å¼±é˜´ç¦»å交æ¢ä»‹è´¨ã€‚广泛用于生物制è¯å’Œç”Ÿç‰©å·¥ç¨‹ä¸‹æ¸¸è›‹ç™½è´¨ã€æ ¸é…¸åŠå¤šè‚½çš„离å交æ¢åˆ¶å¤‡ã€‚
1 外观
本å“呈白色,çƒçŠ¶ã€æ— å—…ã€æ— 味ã€æ— 肉眼å¯è§æ‚质。
2 ç†åŒ–æŒ‡æ ‡
项 目
|
指 æ ‡
|
离å交æ¢åŸºå›¢
|
-O-CH2CH2-N+(C2H5)2H
|
离å交æ¢ç±»åž‹
|
弱阴离å,å¯äº¤æ¢ç¦»åCl-
|
基 质
|
6%交è”ç¼è„‚ç³–
|
蛋白质å¸é™„容é‡
|
110mgHSA/ml介质
|
总离å交æ¢å®¹é‡
|
0.11~0.16 mmol/ml 介质
|
形状
|
çƒå½¢
|
粒径
|
45~165 μm
|
æµé€Ÿ*
|
300~600 cm/h;最大æµé€Ÿ750 cm/h
|
工作温度
|
4~40℃
|
è€çƒ
|
pH7æ°´ä¸120℃ 30min
|
è€åŽ‹
|
0.3 MPa
|
pH稳定性
|
1~14 (çŸæ—¶é—´ ,在ä½æ¸…æ´—);2~12 (长时间)
|
pH工作范围
|
2~9
|
化å¦ç¨³å®šæ€§
|
在以下液体ä¸ç¨³å®šï¼š
所有常用的水相缓冲液;1mol/Læ°¢æ°§åŒ–é’ ï¼›
8mol/Lå°¿ç´ ï¼›6mol/Lç›é…¸èƒï¼›70% 乙醇
|
*检测æ¡ä»¶ï¼š 层æžæŸ±10mm×300mm *柱床高15cm,25℃,æµåŠ¨ç›¸ä¸º0.1mol/LNaCl。
3 包装
产å“以èšèƒºé…¯ç“¶å¯†å°åŒ…è£…ï¼Œå¤–è´´æ ‡ç¾ï¼Œæ³¨æ˜Ž“å“åã€ä½“积ã€é¢—粒大尔ç‰å†…容。
4 è¿è¾“
è¿è¾“ä¸åº”é¿å…日晒ã€é›¨æ·‹ã€é‡åŽ‹ï¼Œä¸¥ç¦ä¸Žæœ‰æ¯’ã€æœ‰å®³ç‰©å“æ··è¿ã€‚
5 è´®å˜
产å“应密å°è´®å˜åœ¨4℃~25℃(ä¿å˜æº¶æ¶²ä¸º20% 乙醇),通风ã€å¹²ç‡¥ã€æ¸…æ´çš„地方。ä¸èƒ½å†·å†»ã€‚
用过的柱åè´®å˜åœ¨4℃(20% 乙醇)。
6 注æ„事项
本产å“é¿å…与氧化剂接触;é¿å…在pH值 < 4时长时间暴露(一周,20℃)。
7 ä¿è´¨æœŸ
5年。
8 应用
本产å“具有高化å¦ç¨³å®šæ€§ã€é«˜æµé€Ÿã€é«˜è½½é‡ã€å¥½çš„机械性能ã€å¯åœ¨ä½æ¸…æ´—ã€å¤šæ¬¡é‡å¤ä½¿ç”¨ç‰ç‰¹ç‚¹ï¼Œéžç‰¹å¼‚性å¸é™„低,回收率高,适用于工业规模生产,适用于在pH工作范围内å¯å½¢æˆè´Ÿç¦»å的生物大分å的分离纯化,广泛用于生物制è¯å’Œç”Ÿç‰©å·¥ç¨‹ä¸‹æ¸¸è›‹ç™½è´¨ã€æ ¸é…¸åŠå¤šè‚½çš„离å交æ¢åˆ¶å¤‡ã€‚
下é¢ç®€è¦ä»‹ç»ä»‹è´¨çš„使用过程。
8.1 装柱
(1)让所有的æ料和试剂达到室温。é…制åˆå§‹ç¼“冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。
(2ï¼‰æ ¹æ®æŸ±å大å°å–所需é‡çš„å‡èƒ¶ï¼Œæ¸…洗掉20%乙醇,抽干,用åˆå§‹ç¼“冲液(按å‡èƒ¶ï¼šç¼“冲液=3:1的比例)é…æˆåŒ€æµ†ã€‚
(3)将柱内åŠæŸ±å底端用水或缓冲液润湿并ä¿æŒä¸€å°æ®µæ¶²ä½ï¼ˆæ¶²é¢ç•¥é«˜äºŽæ»¤è†œï¼‰ï¼ŒåŠ¡å¿…ä½¿åº•ç«¯æ— æ°”æ³¡ã€‚
(4)用玻璃棒引导匀浆沿ç€æŸ±å†…å£ä¸€æ¬¡æ€§å€’入柱内,注æ„勿使产生气泡。打开柱å出液å£ï¼Œä½¿å‡èƒ¶åœ¨æŸ±å†…自由沉é™ï¼Œè¿žç»“好柱å顶端柱头。
(5ï¼‰æ‰“å¼€è •åŠ¨æ³µï¼Œè®©ç¼“å†²æ¶²ç”¨ä½¿ç”¨æ—¶æµé€Ÿçš„1.33å€çš„æµé€Ÿæµè¿‡ï¼Œä½¿æŸ±åºŠç¨³å®šã€‚用2~3å€æŸ±ä½“积的缓冲液平衡柱å。
8.2 平衡
让平衡缓冲液以一定æµé€Ÿæµè¿‡æŸ±å,到æµå‡ºæ¶²ç”µå¯¼å’ŒpHä¸å˜ã€‚平衡液是低浓度的缓冲溶液,如Tris ã€PBSç‰ã€‚
8.3 ä¸Šæ ·
(1ï¼‰æ ·å“用平衡液é…åˆ¶ï¼Œæµ‘æµŠçš„æ ·å“è¦ç¦»å¿ƒå’Œè¿‡æ»¤åŽä¸Šæ ·ã€‚ç›æµ“åº¦å¤ªå¤§çš„æ ·å“处ç†åŽå†é…。
(2ï¼‰ä¸€èˆ¬æƒ…å†µæ˜¯è®©ç›®æ ‡äº§å“结åˆåœ¨æŸ±å上,用平衡液洗去æ‚质,å†é€‰æ‹©ä¸€ç§æ´—è„±æ¶²æ´—ä¸‹ç›®æ ‡äº§å“。
(3ï¼‰ä»‹è´¨å¯¹æ ·å“组分å¸é™„的程度å–å†³äºŽæ ·å“的带电性质ã€æµåŠ¨ç›¸çš„离å强度和pH值。ç›æµ“度å°ï¼Œä»‹è´¨å¯¹æ ·å“组分å¸é™„较牢。用DEAE介质时,推èçš„pHå€¼æ˜¯å¤§äºŽç›®æ ‡äº§å“ç‰ç”µç‚¹1个å•ä½ã€‚
8.4 洗脱
DEAE介质å¯ç”¨å¢žå¤§ç›æµ“度或å‡å°pH值进行洗脱,常用增大ç›æµ“度的办法洗脱。
8.5 å†ç”Ÿ
一般用高ç›æµ“度的缓冲液(å«1~2mol/L NaCl)洗或å‡å°pHæ´—10å€ä»¥ä¸ŠæŸ±ä½“积,接ç€ç”¨ç»“åˆè›‹ç™½çš„平衡液洗到平衡,å¯å†æ¬¡ä½¿ç”¨ã€‚
若有失活蛋白质或脂类物质在å†ç”Ÿæ—¶æ´—ä¸æŽ‰ï¼Œå¯ç”¨åœ¨ä½æ¸…洗(CIP)除去。
8.6 在ä½æ¸…æ´—
(1)对于以离å键结åˆä¸ŠåŽ»çš„蛋白,å¯ä»¥ç”¨2M Nacl去除。
(2)对沉淀蛋白ã€å¯¹ä»¥ç–水性结åˆçš„蛋白或脂类,å¯ç”¨1M NaOH 去除。
(3)对强ç–水性结åˆçš„蛋白ã€è„‚ç±»ç‰ï¼Œç”¨4~10å€æŸ±ä½“积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,但è¦æ³¨æ„有机溶剂的浓度以梯度的方å¼é€æ¸å¢žåŠ ,å¦åˆ™å®¹æ˜“产生气泡。
清洗完毕åŽï¼Œç”¨è‡³å°‘3å€ç¼“冲液平衡柱å。
8.7 注æ„
在装柱ã€ä½¿ç”¨å’Œä¿å˜æŸ±å的时候,è¦é¿å…柱åæµå¹²ï¼Œæ°”泡进入。
在使用过程ä¸ï¼Œä¸èƒ½ä½¿ç”¨å¼ºé…¸ï¼Œå¦‚使用酸洗,应使用浓度低于0.1 M的冰醋酸。
8.8 去çƒæº
用0.5Mçš„æ°¢æ°§åŒ–é’ æ¸…æ´—æŸ±å5~6å°æ—¶æˆ–用0.1Mçš„æ°¢æ°§åŒ–é’ 24å°æ—¶?;蛴é¡éŸµè·¯æ¤’ú街枞コîŒ?/span>
(1)2å€æŸ±ä½“积的70%乙醇;
(2)2å€æŸ±ä½“积50mM Tris-HCl pH7.5ï¼›
(3)1å€æŸ±ä½“积4Må°¿ç´ ï¼›
(4)3å€æŸ±ä½“积的Tris缓冲液+0.1M Naclï¼›
ä»¥ä¸Šç¼“å†²æ¶²éƒ½åœ¨æ— çƒæºçš„åŒè’¸æ°´ä¸é…制。
8.9 消毒
用0.5~1M NaOH室温下洗8~10å€æŸ±ä½“积,åˆå§‹ç¼“冲液平衡柱å。
8.10 çèŒ
置介质于高压çèŒé”…ä¸120℃下30分钟。