什么是离子对试?
一、什么是离子对试剂?离子对试剂是由强亲水离子形成,反作用于样品分子的中性离子对。因此,可用于同时分离带电分子和非带电分子。
二、哪些色谱柱和流动相可选离子对试剂?一般可适用所有色谱固定相,流动相至少含用乙腈的情况下)。当使用长链的离子对试剂时,如:十六烷基硫酸铵或十二烷基硫酸钠,色谱柱将选用反相色谱柱。
三、离子对试剂的适用浓度短链离子对试剂:5×10-3m0l/L 长链离子对试剂:5×10-4m0l/L
常用离子对试剂:
戊烷磺酸钠 HPLC 5g 302¥ 进口 现货
戊烷磺酸钠 HPLC 25g 925¥ 进口 现货
己烷磺酸钠 HPLC 5g 302¥ 进口 现货
己烷磺酸钠 HPLC 25g 925¥ 进口 现货
庚烷磺酸钠 HPLC 5g 281¥ 进口 现货
庚烷磺酸钠 HPLC 25g 873¥ 进口 现货
辛烷磺酸钠 HPLC 5g 302¥ 进口 现货
辛烷磺酸钠 HPLC 25g 925¥ 进口 现货
十二烷磺酸钠 HPLC 5g 707¥ 进口 现货
十二烷磺酸钠 HPLC 25g 1860¥ 进口 现货
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离子对试剂的选择 离子对试剂的种类和浓度对分离效果都有较大和影响.离子对试剂种类的选择依赖于被分离样品的性质.被分离溶质是强酸或强碱,离子对试剂可以是强酸或强碱, 弱碱或强酸,弱酸,如被分离的溶质是弱酸或弱碱,则选用的离子对试剂必须是强碱或强酸.对于溶质结构性质相差较大的混合样品,离子对试剂种类的选择并没有 特殊要求.离子对试剂疏水性的差别可以通过调节离子对试剂浓度和有机溶剂浓度获得满意的分离效果.
离子对试剂用于高压液相离子对萃取的液相色谱法分离分析强极性有机酸和有机碱的好方法。广泛应用于生物化学,药物学,和石油化工等领域。
一、用于酸性化合物 1、四丁基氢氧化铵(10%水溶液) 2、四丁基溴化铵 3、十二烷基三甲基氯化铵
二、用于酸性化合物 1、戊烷磺酸钠 2、己烷磺酸钠 3、庚烷磺酸钠 4、辛烷磺酸钠 5、癸烷磺酸钠
离子对试剂是高效液相色谱专用试剂,主要分析测试有机碱类离子化合物,代替离子交换法,具有可靠的分离效果。也可用于分析多肽和蛋白质,是制备抗静电聚脂纤维的中间体.
离子对试剂知识二
1、作用原理
“加入离子对试剂后,它可以与待分析的物质(多为在溶液状态时显以与离子对试剂相反的电荷)结合成离子对而呈中性,这样非极性就表现出来,从而在色谱柱上有保留行为。”
我觉得离子对试剂很像胶黏剂,一头以离子吸引住待测物(也是离子),另一头以碳链与固定性作用,从而把待测物保持在固定相上 。它的优点和缺点,都是因为这样的特性。
2、试剂选择
“离子对分为正离子对和负离子对,分析酸性样品(确切的说应该是作用基团)用正离子对试剂,分析碱性样品用负离子对试剂。
正离子对试剂可以吸附带负电荷的样品组分,负离子对试剂反之。戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠……十二烷基磺酸钠都属于负离子对试剂;四丁基溴化铵、四丁基硫酸氢铵一类属于正离子对试剂。
离子对要考虑样品体系的复杂性和干扰物的特性,先用原则一般尽可能使用碳链短的先,这样可以避免强保留造成对柱子效能的影响,同时,浓度尽可能的低,以保证对柱子填料的稳定性影响最小及清洗方便。”
看来做实验下手轻点儿好,从碳链短的开始,从低浓度开始,不行再慢慢加。不过这次的使用经验是从碳链长度中等的开始,可以更快看到效果,节约摸索分析条件的时间。同时流动相PH值尽可能低以确保离子化程度。
3、试剂的使用
“离子对试剂不一定是表面活性剂,如己烷和庚烷磺酸钠,又如三乙胺或四丁基溴化胺,不具表面活性作用。所以用己烷和庚烷盐就没有泡末,用四丁基溴化胺也不产生气泡。十二烷基磺酸钠(或硫酸钠),或者十六烷基溴化钠(CTAB,一种做阴离子用的阳性表面活性剂),在浓度高的时候容易产上泡末。做HPLC时流动相里加的SDS或CTAB浓度一般不会太高,一般在0.1%以下,而且流动相里有甲醇等有机溶剂,高浓度的有机溶剂有破乳的作用,因此,混合后的流动相泡末应该不会很多。另外,做电泳加入的SDS量很大的比如做蛋白质SDS胶,或者毛细管电泳里的MECC,SDS浓度很高,而且没有或者有很少比例的有机改性剂,当然会有气泡,跟HPLC不完全相同。”
达人们的意思我看明白了,就是有点泡沫不要怕,确保溶液摇匀就好。
使用离子对试剂时,调节保留时间的方式与普通反相不同,变化有机相比例没有改变PH值来得有效。
“当流动相PH值较高时,样品以中性形式存在,那么正电荷较少,相应的保留较弱;当流动相PH值较低时,样品便以质子碱H+形式的离子状态存在,那么正电荷与固定相上带负电荷的-SO3强烈吸附,相应的保留会非常强。”
“再说明一下B物质的pKa,其值为10.5,在pH为4.5、3.8时都以离子态存在,这点没错,虽然都是离子态,都是99%以上,但从量上说还是有点不一样的。任何物质以离子态存在时都有一个平衡的状态:B+(H+)==(BH+),这里存在着一个平衡常数K(或者说离解常数),于是pH不同时,H+不同,对应的B、BH+也不同。所以才会出现pH不同,保留值会不同。
另外我认为4.5和3.8的pH相差不大,其改变对物质的保留值影响不会很大,因为在流动相中还受到很多因素的影响。”
4、使用后清洗
大家都强调离子对试剂要冲洗较长时间才能洗去。想想也知道那简直是一定的,使用前平衡了老半天呢,要是轻易就能洗去就怪了。
对于多数离子对试剂,清洗还是比较简单的,平时的水——甲醇就能奏效,只是时间必须长点,2小时比较好。
有些例子比较特殊:
“如果用TBA的话应该需要好好洗洗柱子,因为这种胺类的东西不容易洗干净,且会慢慢溶解硅胶。 通常TBA是用0.1%的磷酸,(其中含有100mM 高氯酸钠)与甲醇 1:1 来洗。磷酸的作用是调节pH, 高氯酸钠可以把胺带下来,甲醇增加对有机物的溶解度。”
“根据试验经验,SDS在酸中的溶解性较差,因为它是强碱弱酸盐,在酸性条件下可以生成不溶于水的弱酸十二烷基磺酸,但此酸在有机相中溶解性较好,所以即使在水相中有不溶解的SDS,在加入有机相后反而会使之溶解。所以在流动相中不含有其他盐时,完全可以用比例较高的有机相水洗涤。”
5、其他
很早就知道,醋酸铵可以起部分离子对试剂的作用,没想到TFA也可以。
“英文文献中是经常称之为ion-pair reagent的!而且不只是用来掩蔽填料上残留的活性硅羟基,TFA的氟端还能与分析物的疏水部分相“配对”呢”
“我觉得缓冲液可以更准确的控制所需的PH值,而加酸所得到的PH值不够稳定,很容易随着温度、流动相组成的微小变化而改变,但是缓冲液中的盐成分对色谱柱的使用寿命来讲不是什么好事。
选用酸还是缓冲液来控制流动相PH值,最好依据分析方法的耐用性来选择!保留性、选择性对PH的变化不是很敏感的话,加酸应该就可以了!
另外:磷酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液可以控制的PH值范围是不同的!
磷酸盐可以控制PH值范围在2.1~3.1和6.2~8.2
醋酸盐可以控制的PH缓冲范围是3.8~5.8”